Un grupo de investigadores pertenecientes a la Facultad de Medicina de la Universidad de Minnesota han empleado la herramienta de edición de genes CRISPR/Cas9 para desarrollar dos pruebas rápidas de diagnóstico de flujo lateral.
Los CRISPR son segmentos de ADN procariótico en los que están presentes repeticiones cortas de secuencias de bases. A cada una de estas repeticiones le siguen segmentos cortos de “ADN espaciador” de exposiciones anteriores a un virus bacteriano o plásmido. Una técnica de edición que genética que viene utilizándose desde el año 2013. Mediante la administración de la enzima Cas9 y los ARN guía apropiados (ARNsg) en una célula, el genoma del organismo se puede cortar en cualquier ubicación deseada. El sistema CRISPR/Cas9 convencional de Streptococcus pyogenes está formado por dos partes: la enzima Cas9, que escinde la molécula de ADN y guías específicas de ARN que llevan la proteína Cas9 al gen diana en una hebra de ADN.
Partiendo de esta base los investigadores han integrado los distintos reactivos que actualmente están disponibles para su comercialización en un ensayo de flujo lateral (LFA, por sus siglas en inglés) basado en CRISPR/Cas9, que podría resultar útil a la hora de identificar secuencias del SARS-CoV-2 con especificidad de una sola base. Han desarrollado además un ensayo rápido múltiplex de escisión de nucleasa CRISPR/Cas9 de fluorescencia, con capacidad de detectar y diferenciar el SARS-CoV-2 de otras enfermedades respiratorias virales como la influenza A y B y el virus sincitial respiratorio (VSR) en una sola reacción.
“La aprobación de la vacuna contra el SARS-CoV-2 es muy prometedora, pero el tiempo entre las primeras dosis y la inmunidad de la población puede ser de meses. Esta plataforma de pruebas puede ayudar a cerrar la brecha entre la inmunización y la inmunidad”
Las tiras reactivas del LFA utilizan isotiocianato de fluoresceína (FITC)/6-carboxifluoresceína (FAM) y biotina unidas para generar un resultado positivo. Los investigadores han empleado un cebador de PCR marcado con FITC/FAM y un Cas9 biotinilado inactivo con nucleasa (“muerto”) y un solo ARNsg específico para el gen ORF8a del SARS-Co-V-2 para marcar los amplicones para su detección mediante el LFA. Un trabajo que ha permitido lograr un enfoque de resolución de un solo nucleótido y evitó falsos positivos de dímero de cebador o artefactos de amplificación no específicos que podrían ocurrir con el uso de cebadores en tándem marcados con FITC y biotina para los LFA.
“La aprobación de la vacuna contra el SARS-CoV-2 es muy prometedora, pero el tiempo entre las primeras dosis y la inmunidad de la población puede ser de meses”, explica el primer autor del estudio, el doctor Mark J. Osborn, profesor asistente de pediatría en la Facultad de Medicina de la Universidad de Minnesota. “Esta plataforma de pruebas puede ayudar a cerrar la brecha entre la inmunización y la inmunidad”.